Breve introducción a la cromatografía líquida
La historia de la cromatografía líquida (CL) comenzó a principios del siglo XX. En 1906, el botánico ruso Mikhail Tswett inventó la CL para separar diversos pigmentos vegetales. Inyectó el extracto de la planta y éter de petróleo a través de una columna de vidrio rellena de carbonato cálcico.
Como esto se hizo en una columna de vidrio, pudo observar los cambios en el interior de la columna. Al principio, sólo hay una capa de pigmento en la parte superior de la columna. Pero con el paso del tiempo, el pigmento se separa en cuatro capas de colores diferentes. La investigación posterior descubrió que esas cuatro capas eran verde-azulada; clorofila-a, verde-amarillenta; clorofila b, amarilla; xantina, y naranja; caroteno.
Todo el proceso de separación duraba varias horas, por lo que no era un método muy práctico. Este largo tiempo de análisis fue una de las razones por las que la LC no se convirtió en una herramienta analítica popular hasta la década de 1970, medio siglo después de la invención de Mikhail Tswett.
*La cromatografía es una técnica de separación y la palabra cromatografía tiene su origen en chroma que significa "color" y graphy que significa "escribir". La cromatografía es el equipo de separación y el cromatograma es un gráfico de salida obtenido a partir del análisis.
Introducción a la HPLC
HPLC son las siglas de High-Performance Liquid Chromatography (cromatografía líquida de alto rendimiento). Antes de que existiera la HPLC, el análisis LC se realizaba mediante el flujo gravitacional del eluyente (el disolvente utilizado para el análisis LC), por lo que se necesitaban varias horas para completar el análisis. Incluso las mejoras añadidas posteriormente nos permiten acortar ligeramente el tiempo de análisis. Esos sistemas clásicos/iniciales de CL se denominan "cromatografía de baja presión" o "cromatografía en columna".
En la década de 1970, en EE.UU., Jim Waters fundó Waters Corporation y empezó a vender instrumentos de HPLC. Esto promovió el uso de la HPLC en ámbitos de análisis prácticos. Los sistemas LC que desarrolló Waters Corporation utilizaban una bomba de alta presión que generaba un flujo rápido de eluyente, con lo que se conseguía una mejora espectacular del tiempo de análisis. En comparación con la "cromatografía de baja presión", los nuevos tipos se denominaron "cromatografía líquida de alta presión". Por eso se solía pensar que HPLC significa cromatografía líquida de alta presión, sin embargo, hoy en día es un acuerdo común que HPLC significa cromatografía líquida de alto rendimiento. Otro gran cambio con respecto a la fecha de Tswett fueron los métodos de adquisición de datos. En lugar de observar los cambios de capas con los ojos, el sistema detector se acoplaba a la LC y el resultado se registraba en un gráfico de papel. Si tuviéramos que demostrar el resultado del análisis de Tswett en un gráfico (cromatograma).
Inicialmente, el sistema HPLC se denominaba sistema de Waters Corporation. Todavía hoy, Waters Corporation es el pionero de la HPLC, pero hay varias otras empresas que fabrican y venden sistemas HPLC. Representación del análisis LC de Tswett.
Técnicamente hablando, la palabra LC representa toda la Cromatografía Líquida, incluyendo la LC de baja presión, sin embargo, la mayoría de los sistemas LC son HPLC por lo que a menudo la palabra LC se utiliza como comparable a HPLC.
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