Phases d'affinité Sélectivité
Les phases d'affinité offrent la spécificité et la sélectivité les plus élevées pour les séparations et les purifications biomoléculaires. Des purifications de plusieurs ordres de grandeur peuvent être réalisées en une seule étape. Les séparations par affinité permettent souvent d'éliminer des contaminants difficiles à éliminer à l'aide de procédures chromatographiques conventionnelles.
Mécanisme
La chromatographie d'affinité repose sur un mécanisme de type "serrure et clé". Un ligand d'affinité, spécifique d'un site de liaison sur la molécule cible, est couplé à une matrice de chromatographie inerte. Dans des conditions de liaison appropriées, les molécules cibles sont liées au ligand d'affinité en fonction de sa spécificité. Les solutés non liés sont lavés à travers la colonne. Les molécules cibles adsorbées sont ensuite désorbées et éluées de la colonne. Une purification de plusieurs milliers de fois peut être obtenue grâce à la grande sélectivité des interactions d'affinité.
Les résines d'affinité spécifiques à un groupe (par exemple Tosoh Bioscience) lient les molécules partageant des caractéristiques structurelles spécifiques. Si une plus grande spécificité est requise, il est également possible d'utiliser des ligands ayant une spécificité précise pour la molécule cible. Par exemple, la phase protéine A a une affinité spécifique pour la région Fc des immunoglobulines.
Chromatographie d'immunoaffinité
La chromatographie d'immunoaffinité est une forme spécialisée de chromatographie d'affinité, qui utilise un anticorps ou un fragment d'anticorps comme ligand immobilisé sur un support solide de manière à conserver sa capacité de liaison. La figure 1 présente un schéma des étapes d'une analyse d'immunoaffinité typique : chargement de l'échantillon, lavage de la colonne pour éliminer les composants de la matrice et les impuretés, et élution du composé cible.
Applications
Les techniques de chromatographie d'affinité et d'immunoaffinité sont applicables dans un grand nombre de disciplines, notamment la biochimie, l'immunochimie, la virologie et la biologie moléculaire. En raison de la disponibilité croissante d'une variété d'anticorps, les séparations basées sur les techniques d'immunoaffinité sont de plus en plus utilisées dans un large éventail d'applications impliquant la purification d'échantillons biologiques complexes.
Les principaux domaines d'application de la chromatographie d'immunoaffinité sont les protéines et les enzymes. La sélectivité de la méthode peut être améliorée en combinant la préconcentration et le prétraitement des échantillons offerts par les phases d'immunoaffinité avec les capacités de séparation de la CLHP en phase inversée. La technique peut également être utilisée avant les analyses MS en protéomique.
Colonnes et masses d'affinité Biovanix
Analyse des AcM Colonne HPLC Prosep A
| Matériau de base | Taille des particules | Débit | Service de la vie* | Gamme de pH | |
| Prosep A | Polymère | 40um | 0,5-3 ml/min | 3000 cercles | 2-10 |
| Prosep A PLUS | Polymère | 20um | 0,5-3 ml/min | 3000 cercles | 2-10 |
*Le service vie est basé sur des conditions d'analyse.
Biovanix A50 & PrA/G Phases d'affinité
| Matériau de base | Taille des particules | Débit | Capacité | Gamme de pH | |
| Biovanix Affinity A50 | Polymère | 40um | 0,5-3 ml/min | 40 mg d'IgG humaine | 2-10 |
| Biovanix Pr A | Agarose | 90um | 0,5-3 ml/min | 20 mg d'IgG humaine | 2-12 |
| Biovanix Pr G | Agarose | 90um | 0,5-3 ml/min | 20 mg d'IgG humaine | 2-8 |
| Biovanix Ni-IMAC | Agarose | 90um | 0,5-3 ml/min | 30 mg Myoglobine | 3-12 |
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