Фазы сродства Селективность

Аффинные фазы предлагают наивысшую специфичность и селективность при биомолекулярных разделениях и очистках. Очистки до нескольких порядков величины достижимы за один этап. Аффинные разделения часто позволяют удалить примеси, трудноустранимые с помощью обычных хроматографических процедур.

Механизм

Основой аффинной хроматографии является механизм типа ‘ключ к замку’. Аффинный лиганд, специфичный для сайта связывания на целевой молекуле, ковалентно связывается с инертной хроматографической матрицей. При соответствующих условиях связывания целевые молекулы связываются с аффинным лигандом в соответствии с его специфичностью. Несвязанные растворенные вещества промываются через колонку. Затем адсорбированные целевые молекулы десорбируются и элюируются из колонки. Благодаря высокой селективности аффинных взаимодействий может быть достигнуто очищение в несколько тысяч раз.

Специфичные для группы аффинные смолы (например, Tosoh Bioscience) связывают молекулы, имеющие общие структурные особенности. Альтернативно, если требуется большая специфичность, могут использоваться лиганды с точной специфичностью к целевой молекуле. Например, фаза белка А имеет специфическое сродство к Fc-региону иммуноглобулинов.

Иммуноаффинная хроматография

Иммуноаффинная хроматография — это специализированная форма аффинной хроматографии, использующая антитело или фрагмент антитела в качестве лиганда, иммобилизованного на твердой подложке таким образом, чтобы сохранить его связывающую способность. На рисунке 1 показана принципиальная схема стадий, участвующих в типичном иммуноаффинном анализе: нанесение образца, промывка колонки для удаления компонентов матрицы и примесей, и элюирование целевого соединения.

Приложения

Методы аффинной и иммуноаффинной хроматографии применимы в различных областях, включая биохимию, иммунохимию, вирусологию и молекулярную биологию. Благодаря растущей доступности разнообразных антител, разделения, основанные на методах иммуноаффинности, все чаще используются в широком спектре применений, связанных с очисткой сложных биологических образцов.

Основные области применения иммуноаффинной хроматографии – белки и ферменты. Селективность метода может быть повышена путем сочетания предварительной концентрирования и предварительной обработки образцов, обеспечиваемых иммуноаффинными фазами, с разделительными возможностями обращенно-фазовой ВЭЖХ. Этот метод также может использоваться перед масс-спектрометрическим анализом в протеомике.

Колонки и массовые загрузки Biovanix Affinity

Анализ моноклональных антител HPLC колонка Prosep A

	Материал основания	Размер частиц	Скорость потока	Сервис жизни	диапазон pH
Просеп А	Полимер	40 микрон	0,5-3 мл/мин	3000 кругов	2-10
Просепт А ПЛЮС	Полимер	20 мкм	0,5-3 мл/мин	3000 кругов	2-10

Лайф servis основан на условиях анализа.

Biovanix A50 & праг Фазы Сродства

	Материал основания	Размер частиц	Скорость потока	Вместимость	диапазон pH
Биованикс Аффинити А50	Полимер	40 микрон	0,5-3 мл/мин	40 мг человеческого IgG	2-10
Биованикс Пра А	Агароза	90 мкм	0,5-3 мл/мин	20 мг человеческого IgG	2-12
Биованикс ПР Г	Агароза	90 мкм	0,5-3 мл/мин	20 мг человеческого IgG	2-8
Биованикс Ни-ИМАК	Агароза	90 мкм	0,5-3 мл/мин	30 мг миоглобина	3-12

Есть проблемы с жидкостной хроматографией? Свяжитесь с нами напрямую.

Биованикс

Biovanix Technology Co., Ltd. — это специализированная биотехнологическая компания. Опираясь на наш основной опыт в области жидкостной хроматографии, мы стратегически развились и стали комплексным поставщиком интегрированных решений, охватывающих весь жизненный цикл исследований, анализа и производства.

Смотреть полное био